2.1 蜡样芽胞杆菌呕吐毒素标准溶液 (C₅₇H₉₆N₆O₁₈, CAS号: 157232-64-9) ：浓度为25 μg/500 μL或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。

2.2 ¹³C6-蜡样芽胞杆菌呕吐毒素标准溶液 (C₅₁¹³C₆H₉₆N₆O₁₈，CAS号: 1487375-69-8) ：浓度为20 µg/mL或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。

2.3 蜡样芽胞杆菌呕吐毒素标准中间液 (1.0 mg/L) ：准确吸取标准溶液 (2.1) 0.200 mL，置于10.0 mL棕色容量瓶中，用乙腈溶液定容至10.0 mL，浓度为1.0 mg/L的标准中间液，于-18 ℃冷冻保存，有效期3个月。

2.4 蜡样芽胞杆菌呕吐毒素内标标准中间液 (1.0 mg/L) ：准确吸取标准溶液 (2.2) 0.500 mL，置于10.0 mL棕色容量瓶中，用乙腈溶液定容至10.0 mL，浓度为1.0 mg/L的标准中间液，于-18 ℃冷冻保存，有效期3个月。

2.5 蜡样芽胞杆菌呕吐毒素标准工作液 (0.1 mg/L) ：准确吸取标准中间液 (2.3) 1.0 mL (1.0 mg/L) 置于10.0 mL棕色容量瓶中，并用乙腈溶液稀释成0.1 mg/L的标准工作液，-18 ℃冷冻保存，有效期1个月。

2.6 蜡样芽胞杆菌呕吐毒素内标标准工作液 (0.1 mg/L) ：准确吸取内标标准中间溶液 (2.4) 1.0 mL，置于10.0 mL棕色容量瓶中，并用乙腈溶液稀释成0.1 mg/L的内标标准工作液，于-18 ℃冷冻保存，有效期1个月。

2.7 标准系列工作溶液：准确吸取0.1 mg/L的标准工作液 (2.5) ，10 μL、50 μL、100 μL、200 μL、500 μL、1000 μL分别置于10.0 mL容量瓶中，加入200 μL 0.1 mg/L的内标标准工作液 (2.6) ，用初始流动相 (流动相A与B体积比为8:2) 制成浓度分别为0.1 μg/L、0.5 μg/L、1.0 μg/L、2.0 μg/L、5.0 μg/L、10.0 μg/L的标准系列溶液，含内标浓度为2.0 μg/L，现用现配。

称取1 g (精确至0.01 g) 均质后的食品样品置于15 mL离心管，加入内标标准工作液 (2.6) (0.1 mg/L) 20 µL，静置30 min后，准确加入5.0 mL乙腈，涡旋混均30 s，超声30 min。4 ℃下12000 r/min离心10 min。转移全部上清液至15 mL离心管中，加入5.0 mL水，涡旋混合30 s，待SelectCore HLB-P固相萃取柱净化。

SelectCore HLB-P固相萃取柱 200mg/6mL

SelectCore HLB-P固相萃取柱经3.0 mL甲醇，3.0 mL纯水依次活化，取3中制备好的食品样品提取液上样（如果上柱溶液粘度较大，过滤较为缓慢，可以1.2 mL/min速度抽滤过柱），待上样液完全过柱后，以3.0 mL纯水淋洗小柱，5.0 mL甲醇洗脱，收集全部洗脱液，氮气浓缩至近干，残渣用1.0 mL初始流动相（流动相A与B体积比为8:2）复溶，过微孔滤膜后供上机测定。

图4、婴幼儿乳粉样品加标MRM谱图

由以上实验谱图和结果可知，花生四烯酸原料、婴幼儿乳粉样品经过SelectCore HLB-P固相萃取柱净化后，不仅有效去除了样品基质干扰及杂质干扰，而且蜡样芽孢杆菌呕吐毒素目标物峰形良好，样品加标回收率均在95%以上。搭配ChromCore 300 C18液相色谱柱进行分析，色谱图峰形对称良好、线性良好（R²=0.9998）、定量准确。