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【应用分享】调制乳粉中合成着色剂的快速检测(GB 5009.35-2023)

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食品合成着色剂目前被广泛应用到食品的加工过程中。鉴于合成着色剂的潜在危害,国家加强了对这类合成着色剂的监管。根据《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》(GB 2760-2024) 规定,在调制乳粉中设有明确使用限量,如日落黄和柠檬黄最大使用量在0.05 g/Kg,胭脂红最大使用量在0.15 g/Kg,亮蓝最大使用量在0.025 g/Kg等等。

纳谱分析依据国标推出SelectCore WAX固相萃取柱 (采用单分散聚乙烯吡咯烷酮专属基质) , 具有净化高效、回收率高、稳定性强的优点,适用于多种复杂基质样品的检测。针对GB 5009.35-2023中原液相方法单针42分钟耗时偏长的问题,纳谱分析优化了液相检测方法:搭配ChromCore C18色谱柱,最快20分钟即可完成分析,整体实验时长缩短30%~50%,显著提升检测效率。



一、适用范围

参照GB 5009.35-2023食品中合成着色剂的测定,本标准适用于饮料、配制酒、调制乳、调味糖浆、风味发酵乳等、冷冻饮品 (风味冰、冰棍类) 、加工水果、腌渍的蔬菜、糖果、酱及酱制品、香辛料、果冻、杂粮粉及其制品、面糊、淀粉及淀粉类制品、胶原蛋白肠衣、即食谷物、谷类和淀粉类甜品、糕点上彩装、蛋卷、焙烤食品馅料及表面用挂浆等、可可制品、巧克力和巧克力制品、调制乳粉、调制奶油粉、调制炼乳、膨化食品、加工坚果与籽类、熟制豆类、糕点、熟肉制品、复合调味料和冰淇淋、雪糕等中11种合成着色剂 (柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红、喹啉黄和赤藓红) 的测定。



二、实验步骤 

1、试剂准备

乙醇氨水溶液:量取无水乙醇700 mL,加入4 mL氨水,用水稀释至1 L,混匀。

5%甲醇水溶液:移取甲醇5 mL,用水稀释并定容至100 mL,混匀。

2%氨水甲醇溶液:移取2 mL氨水,用甲醇稀释至100 mL。

乙酸铵溶液 (20 mmol/L称取1.54 g乙酸铵 (精确至0.001 g) ,加水溶解并稀释至1000 mL。

乙酸铵缓冲溶液,pH=9.0:乙酸铵溶液 (20 mmol/L) 加氨水调pH=9.0。

2%甲酸水溶液:移取甲酸2 mL,用水稀释至100 mL。

2、样品制备

调制乳粉提取:准确称取试样2 g (精确至0.001 g) ,置于50 mL具塞离心管中,加入20 mL石油醚,涡旋1 min,超声或振摇 (速率≥250 r/min) 提取10 min,8000 r/min离心5 min,弃去上清液,油脂含量较高的可重复提取一次,弃去上清液,加入25 mL乙醇氨水溶液,涡旋1 min,50 ℃超声或振摇 (速率≥250 r/min) 提取20 min,8000 r/min离心5 min (若离心后提取液仍然浑浊,可转入高速离心机专用管,15000 r/min离心5 min) ,取上清液置于50 mL容量瓶中,每次加入约5 mL~10 mL乙醇氨水溶液重复提取操作至上清液无明显颜色,离心后合并上清液,用乙醇氨水溶液定容至50 mL,即得提取液。准确吸取提取液10 mL,50 ℃氮气浓缩至3 mL左右,分2~3次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解,作为待净化液。

3、固相萃取方法

SelectCore WAX固相萃取柱 150mg/6mL

活化:依次使用6 mL甲醇、6 mL水活化固相萃取柱,保持柱体湿润;

上样:活化后立即将步骤2中的待净化液以2~3秒/滴的流速加载到固相萃取柱上;

淋洗:依次用6 mL 2%甲酸水溶液和6 mL甲醇淋洗固相萃取柱,弃去淋洗液,真空抽2 min至柱体近干;

洗脱:用6 mL 2%氨水甲醇溶液洗脱,分两次加入,每次3 mL,流速低于2~3秒/滴,收集洗脱液,于50 ℃氮气浓缩至近干,准确加入2 mL pH为9.0的乙酸铵缓冲溶液溶解,溶液用针筒过滤器,孔径0.45 μm的滤膜过滤,弃去2~5滴初滤液,取续滤液作为待测液。

4、高效液相色谱条件

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三、实验谱图及加标回收率数据

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图1、415 nm波长下的合成着色剂标准品、调制乳粉样品、调制乳粉样品加标 (20 mg/kg) 对比图

1.柠檬黄  2.喹啉黄1  3.喹啉黄2  4.喹啉黄3  5.喹啉黄4

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图2、520 nm波长下的合成着色剂标准品、调制乳粉样品、调制乳粉样品加标 (20 mg/kg) 对比图

1.苋菜红  2.新红  3.胭脂红  4.日落黄  5.诱惑红  6.酸性红  7.赤藓红

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图3、610 nm波长下的合成着色剂标准品、调制乳粉样品、调制乳粉样品加标 (20 mg/kg) 对比图

1.靛蓝  2.亮蓝1  3.亮蓝2

加标回收率数据

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因亮蓝通常呈现为两个峰,喹啉黄通常呈现为四个峰,所以根据标准溶液出峰情况,以各色谱峰总的峰面积之和计算回收率。



四、实验结论

由实验谱图和加标回收率结果可以看出,SelectCore WAX固相萃取柱可以有效去除乳粉中基质干扰,调制乳粉基质中11种合成着色剂的回收率均在85%~105%之间,结果准确可靠;采用ChromCore C18色谱柱和改进的液相方法进行检测,着色剂峰形尖锐对称,分离度也完全满足定性和定量要求。

实验注意事项

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1)靛蓝比较容易降解,储备液有效期短,不建议和其它着色剂配成混标,建议现配现用。

2)氨水易挥发,建议洗脱液现配现用。

3)氮吹时不建议气流过大,氮吹至干即可,不建议氮吹时间过长或过干。

4)如果遇到赤藓红的回收率较低,可以选择用乙酸铵:甲醇=9:1 (pH=9) 作为复溶液,可以提高赤藓红的回收率。



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