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食品合成着色剂目前被广泛应用到食品的加工过程中。鉴于合成着色剂的潜在危害,国家加强了对这类合成着色剂的监管。根据《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》(GB 2760-2024) 规定,在调制乳粉中设有明确使用限量,如日落黄和柠檬黄最大使用量在0.05 g/Kg,胭脂红最大使用量在0.15 g/Kg,亮蓝最大使用量在0.025 g/Kg等等。
纳谱分析依据国标推出SelectCore WAX固相萃取柱 (采用单分散聚乙烯吡咯烷酮专属基质) , 具有净化高效、回收率高、稳定性强的优点,适用于多种复杂基质样品的检测。针对GB 5009.35-2023中原液相方法单针42分钟耗时偏长的问题,纳谱分析优化了液相检测方法:搭配ChromCore C18色谱柱,最快20分钟即可完成分析,整体实验时长缩短30%~50%,显著提升检测效率。
一、适用范围
参照GB 5009.35-2023食品中合成着色剂的测定,本标准适用于饮料、配制酒、调制乳、调味糖浆、风味发酵乳等、冷冻饮品 (风味冰、冰棍类) 、加工水果、腌渍的蔬菜、糖果、酱及酱制品、香辛料、果冻、杂粮粉及其制品、面糊、淀粉及淀粉类制品、胶原蛋白肠衣、即食谷物、谷类和淀粉类甜品、糕点上彩装、蛋卷、焙烤食品馅料及表面用挂浆等、可可制品、巧克力和巧克力制品、调制乳粉、调制奶油粉、调制炼乳、膨化食品、加工坚果与籽类、熟制豆类、糕点、熟肉制品、复合调味料和冰淇淋、雪糕等中11种合成着色剂 (柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红、喹啉黄和赤藓红) 的测定。
二、实验步骤
1、试剂准备
乙醇氨水溶液:量取无水乙醇700 mL,加入4 mL氨水,用水稀释至1 L,混匀。
5%甲醇水溶液:移取甲醇5 mL,用水稀释并定容至100 mL,混匀。
2%氨水甲醇溶液:移取2 mL氨水,用甲醇稀释至100 mL。
乙酸铵溶液 (20 mmol/L) :称取1.54 g乙酸铵 (精确至0.001 g) ,加水溶解并稀释至1000 mL。
乙酸铵缓冲溶液,pH=9.0:乙酸铵溶液 (20 mmol/L) 加氨水调pH=9.0。
2%甲酸水溶液:移取甲酸2 mL,用水稀释至100 mL。
2、样品制备
调制乳粉提取:准确称取试样2 g (精确至0.001 g) ,置于50 mL具塞离心管中,加入20 mL石油醚,涡旋1 min,超声或振摇 (速率≥250 r/min) 提取10 min,8000 r/min离心5 min,弃去上清液,油脂含量较高的可重复提取一次,弃去上清液,加入25 mL乙醇氨水溶液,涡旋1 min,50 ℃超声或振摇 (速率≥250 r/min) 提取20 min,8000 r/min离心5 min (若离心后提取液仍然浑浊,可转入高速离心机专用管,15000 r/min离心5 min) ,取上清液置于50 mL容量瓶中,每次加入约5 mL~10 mL乙醇氨水溶液重复提取操作至上清液无明显颜色,离心后合并上清液,用乙醇氨水溶液定容至50 mL,即得提取液。准确吸取提取液10 mL,50 ℃氮气浓缩至3 mL左右,分2~3次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解,作为待净化液。
3、固相萃取方法
SelectCore WAX固相萃取柱 150mg/6mL
活化:依次使用6 mL甲醇、6 mL水活化固相萃取柱,保持柱体湿润;
上样:活化后立即将步骤2中的待净化液以2~3秒/滴的流速加载到固相萃取柱上;
淋洗:依次用6 mL 2%甲酸水溶液和6 mL甲醇淋洗固相萃取柱,弃去淋洗液,真空抽2 min至柱体近干;
洗脱:用6 mL 2%氨水甲醇溶液洗脱,分两次加入,每次3 mL,流速低于2~3秒/滴,收集洗脱液,于50 ℃氮气浓缩至近干,准确加入2 mL pH为9.0的乙酸铵缓冲溶液溶解,溶液用针筒过滤器,孔径0.45 μm的滤膜过滤,弃去2~5滴初滤液,取续滤液作为待测液。
4、高效液相色谱条件

三、实验谱图及加标回收率数据

图1、415 nm波长下的合成着色剂标准品、调制乳粉样品、调制乳粉样品加标 (20 mg/kg) 对比图
1.柠檬黄 2.喹啉黄1 3.喹啉黄2 4.喹啉黄3 5.喹啉黄4

图2、520 nm波长下的合成着色剂标准品、调制乳粉样品、调制乳粉样品加标 (20 mg/kg) 对比图
1.苋菜红 2.新红 3.胭脂红 4.日落黄 5.诱惑红 6.酸性红 7.赤藓红

图3、610 nm波长下的合成着色剂标准品、调制乳粉样品、调制乳粉样品加标 (20 mg/kg) 对比图
1.靛蓝 2.亮蓝1 3.亮蓝2

因亮蓝通常呈现为两个峰,喹啉黄通常呈现为四个峰,所以根据标准溶液出峰情况,以各色谱峰总的峰面积之和计算回收率。