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纽甜是被允许添加到食品中的一种甜味剂,具有甜度高、热量低的特性,纽甜进入人体后不参与机体代谢,90%以上会通过尿液和粪便排出,长期过量摄入可能会引起头痛、恶心等症状。2025食品新国标更新了纽甜的检测方法,纳谱分析依照国标要求,推出适配此标准的样品前处理产品:SelectCore HLB固相萃取柱和ChromCore 120 C18液相色谱柱,可匹配食品中纽甜检测的全过程。
参照GB 5009.247-2025《食品安全国家标准 食品中纽甜的测定》,适用于食品中纽甜的测定。
1、试剂配制
甲酸-三乙胺缓冲液:分别吸取0.8 mL甲酸和2.5 mL三乙胺,加水定容至1 L,pH约为4.5。
混合提取液:量取甲醇400 mL至1 L烧杯,加500 mL甲酸-三乙胺缓冲液,用甲酸调pH到4.5,转移至1 L容量瓶,用甲酸-三乙胺缓冲液定容至刻度。
混合洗脱液:量取甲醇700 mL至1 L容量瓶,用甲酸-三乙胺缓冲液定容至刻度。
乙酸铵溶液(20 mmol/L):称取1.54 g乙酸铵,用500 mL水溶解,加入1.0 mL冰乙酸,加水定容至1 L。
亚铁氰化钾溶液(92 g/L):称取106 g亚铁氰化钾,加入适量水溶解,用水定容至1 L。
乙酸锌溶液(183 g/L):称取220 g乙酸锌,加入适量水溶解,加入30 mL冰乙酸,用水定容至1 L。
氨水溶液(20%):量取200 mL氨水至1 L容量瓶,用水定容至刻度。
2、试样提取
2.1 含胶基的糖果、果冻及鸡精等试样
准确称取5 g试样(精确到0.01 g)于50 mL离心管中,加入25 mL混合提取液,于60 ℃水浴振荡30 min。冷却至室温,用甲酸或氨水溶液(20%)调pH至4.5,超声30 min。加入1 mL亚铁氰化钾溶液(92 g/L)和1 mL乙酸锌溶液(183 g/L),涡旋混匀,4000 r/min离心5 min。上清液经滤纸过滤并转移至50 mL容量瓶。残渣加入20 mL混合提取液,振荡5 min,4000 r/min离心5 min,上清液经滤纸过滤合并,用混合提取液定容至刻度,作为试样提取液待净化。
2.2 油脂类调味料、巧克力及奶油等试样
准确称取5 g试样(精确到0.01 g)于50 mL离心管中,加入25 mL混合提取液,于60 ℃水浴振荡30 min。加5 mL正己烷,振荡5 min,4000 r/min离心5 min,弃去正己烷层,用甲酸或氨水溶液(20%)调pH至4.5,超声30 min。加入1 mL亚铁氰化钾溶液(92 g/L)和1 mL乙酸锌溶液 (183 g/L) , 涡旋混匀,4000 r/min离心5 min。上清液经滤纸过滤并转移至50 mL容量瓶。残渣加入20 mL混合提取液,振荡5 min,4000 r/min离心5 min,上清液经滤纸过滤合并,用混合提取液定容至刻度,作为试样提取液待净化。
2.3 其余试样
准确称取5 g试样(精确到0.01 g)于50 mL离心管中,加入25 mL混合提取液,涡旋5 min,用甲酸或氨水溶液(20%)调pH至4.5,超声30 min。加入1 mL亚铁氰化钾溶液(92 g/L)和1 mL乙酸锌溶液(183 g/L),涡旋混匀,4000 r/min离心5 min。上清液经滤纸过滤并转移至50 mL容量瓶。残渣加入20 mL混合提取液,振荡5 min,4000 r/min离心5 min,上清液经滤纸过滤合并,用混合提取液定容至刻度,作为试样提取液待净化。
3、固相萃取方法
SelectCore HLB固相萃取柱 500mg/6mL
活化: 依次用6 mL甲醇和6 mL水活化固相萃取柱,保持柱体湿润;
上样: 取上述2中10.0 mL试样提取液过固相萃取柱;
淋洗: 5 mL甲酸-三乙胺缓冲液淋洗,弃去全部流出液;
洗脱: 用8 mL混合洗脱液洗脱,收集洗脱液;
洗脱液于60 °C水浴氮吹浓缩至约1 mL,用甲酸-三乙胺缓冲液定容至2.0 mL,作为试样溶液待上机测定。
4、液相色谱条件
ChromCore 120 C18色谱柱 5μm, 4.6×150mm
图3、纽甜标准品、果冻样品、果冻样品加标对比图(加标量:5.0 mg/kg)
由图3、图4及加标回收率数据可以看出,纳谱分析的SelectCore HLB固相萃取柱在前处理阶段可以有效去除样品中杂质,并且回收率符合检测要求;纳谱分析的ChromCore 120 C18色谱柱可以做到杂质和目标物的高效分离、准确检测。
实验注意事项:
1、标准溶液的配制严格按照国标要求,使用甲酸-三乙胺缓冲液配制或稀释;
2、试样提取时请严格按照国标要求调节溶液pH;
3、洗脱液水浴氮吹时请注意气流量不要过大,以免洗脱液损失,影响回收率。