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服务与支持

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【2025中国药典】中药厚朴的47种农残测定分析 (固相萃取法)

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图1、厚朴

图源网络,仅作示意

厚朴为木兰科植物厚朴或凹叶厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮,含有大量色素和挥发油,采用药典常规的固相萃取方式二净化后,在GC-MS/MS分析中部分化合物保留时间会漂移并有干扰。

针对这一情况,纳谱分析根据2025版药典方法,分别采用SelectCore HLB-C中药农残专用柱SelectCore HLB固相萃取柱对厚朴药材提取液进行净化处理。实验结果表明,两种柱子均可有效去除色素及杂质,仪器分析干扰少、回收率良好,净化效果优异。下面一起来看看具体实验数据与效果吧~

适用范围

本方法参考中国药典2025版2341第五法中的固相萃取法,适用于含色素、油脂中药材的农残检测。

实验步骤


1


对照品溶液的制备


1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合液1 mL,置20 mL容量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀,备用。

1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

磷酸三苯酯对照品适量,加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液。量取适量,加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取空白基质样品,用供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份),置氮吹仪上,40 °C水浴浓缩至约0.6 mL,分别加入混合对照品溶液5 μL、10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、200 μL,加乙腈稀释至1 mL,涡旋混匀,即得。


2


供试品溶液的制备

提取(直接提取法精密称取5 g样品(过3号筛),置100 mL具塞离心管中,加氯化钠1 g,加入50 mL乙腈,匀浆处理2 min,离心后取上清液,残渣再加50 mL乙腈,匀浆处理1 min,离心后,吸取上清液,合并两次提取上清液,减压浓缩至5~10 mL,加乙腈定容至25 mL,摇匀,即得。(注:可根据仪器灵敏度适当调整供试品溶液的最终稀释倍数)


3


净化

3.1 GC-MS/MS样品:

SPE柱: SelectCore HLB-C中药农残专用柱 500mg/6mL

净化:SelectCore HLB-C中药农残专用柱,加入4 mL乙腈:甲醇(10:1)活化,量取2中厚朴直接提取法制备的溶液2 mL上样至已活化的SelectCore HLB-C中药农残专用柱中,收集流出液,待所有提取液进入柱体填料后,加入4 mL乙腈:甲醇(10:1)溶液洗脱,收集洗脱液,合并流出液与洗脱液、减压回收(或40 ℃氮吹)至2 mL,即得。

3.2 LC-MS/MS样品:

SPE柱: SelectCore HLB固相萃取柱 200mg/6mL

净化:量取2中厚朴直接提取法制备的溶液3 mL,过SelectCore HLB固相萃取柱,收集全部净化液,混匀,即得。


4


仪器分析

4.1 GC-MS/MS测定:

基质加标配制:精密量取3.1中净化后样品液1 mL,氮吹至0.6 mL加入混合对照溶液,乙腈定容至1 mL,再加入0.1 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。

样品溶液配制:精密量取3.1中净化后样品液1 mL,加入0.1 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。

4.2 LC-MS/MS测定:

基质加标配制:精密量取3.2中净化后样品液1 mL,氮吹至0.6 mL加入混合对照溶液,乙腈定容至1 mL,再加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。

样品溶液配制:精密量取3.2中净化后样品液1 mL,加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。


5


气相色谱-串联质谱法(岛津GC-MS-TQ8040 NX)


5.1  色谱条件

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5.2  质谱条件 

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6


高效液相色谱-串联质谱法(岛津LC-MS 8045)


6.1  色谱条件

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6.2  质谱条件

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7


实验谱图及加标回收率结果

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图2、厚朴提取液原液、SelectCore HLB净化后的厚朴提取液和SelectCore HLB-C净化后的厚朴提取液颜色对比图

①为厚朴提取液原液(直接提取法提取)

②为SelectCore HLB净化后的厚朴提取液(上样量3 mL)

③为SelectCore HLB-C净化后的厚朴提取液(上样量2 mL)

7.1 厚朴基质加标GC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

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                                            SelectCore HLB-C净化处理厚朴基质LOQ浓度点加标谱图

                                                                     (GC-MS/MS方法)

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7.2 厚朴基质加标LC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

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                                       SelectCore HLB净化处理厚朴基质LOQ浓度点加标谱图

                                                                (LC-MS/MS方法)

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7.3 加标回收率结果

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图片

注:加样回收率应在70%~120%之间。在满足重复性要求且待测指标未检出的情况下,部分农药回收率可放宽至50%~140%。


8


实验讨论

1)由于LC-MS/MS分析方法所使用的色谱柱体积较小,且流动相体系为甲醇体系,而样品溶剂使用乙腈,保留时间较短的目标物溶剂效应较为明显,可采取以下任一方法来解决:

①:增加柱前体积,例如适当增加柱前管路长度;

②:增加样品溶液中的水含量,例如将4.2中0.3 mL水增加到0.5 mL;

③:采用混合进样的方式,进样的同时注入10 μL水;

④:溶剂置换,取3.2中净化后样品液1 mL,40 ℃氮吹至0.4 mL,加入混合对照品,甲醇定容至1 mL,再加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。

2)由于对硫磷在LC-MS/MS上响应较低,如GC-MS/MS无干扰,推荐使用GC-MS/MS监测结果;

3)LC-MS/MS监测化合物中:氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜、氟虫胺均为负离子监测模式;

4)GC-MS/MS上由于基质油性成分影响,会造成苯线磷与甲基硫环磷保留时间向后漂移1 min左右,需要用基质标单独定位后再建立总MRM采集方法,也可直接采用LC-MS/MS结果;

5)久效磷、氧化乐果采用LC-MS/MS结果。




9


实验结论

通过以上实验数据可以看出,厚朴使用直接提取法处理,搭配SelectCore HLB-C中药农残专用柱,或SelectCore HLB固相萃取柱净化后,再搭配ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱分析测定,各化合物出峰状况良好,上述解决办法有效地提高了实验效率,也为厚朴的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了参考。

相关产品信息

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2025版《中国药典》2341法

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