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【应用分享】BioCore SEC-120色谱柱在GLP-1分析中表现卓越


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前言

图源于网络，侵联删除

以司美格鲁肽、替尔泊肽和利拉鲁肽为代表的GLP-1受体激动剂，是治疗糖尿病与肥胖等相关代谢疾病的明星分子，已成为制药行业增长最快、前景最广阔的治疗模式之一。

然而，随着GLP-1分子的快速发展，其纯度、聚集体及稳定性的表征挑战严峻：体积排阻色谱（SEC）传统上虽用于多肽的聚集检测与纯化，但在面对经化学修饰后的多肽时表现较为有限。


近日，来自瑞士日内瓦大学与基因泰克公司的研究团队，在色谱分析领域国际权威学术期刊——Journal of Chromatography A上发表重要研究成果，对来自6个品牌的11款SEC色谱柱在GLP-1分析中的真实性能进行了系统性评估。结果显示：来自纳谱分析的4款色谱柱 (表1中C1-C4，以下用#1-#4柱表示) 在多个关键维度上表现突出。


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表1. 研究所用的4款纳谱SEC色谱柱的特性参数

所有孔隙度和k"极限值均为该研究实验测定值

1


模型肽分析

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在非变性条件下 (图1) ，来自纳谱的四款色谱柱均实现了四种模型肽 (3-51个氨基酸) 的部分分离。其中，#3柱（C3）因其高度亲水的表面配体设计，峰形最为尖锐。在变性条件下 (图2)，#3柱（C3）和#4柱（C4）对四种模型肽的最小分离度分别达0.97和0.90，位列所有测试柱最佳之一。#4柱（C4）的理论塔板数高达52,000，折合塔板高度 (h) 接近1，显著优于传统SEC的典型表现 (2＜h＜3) 。

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图1、非变性SEC条件下，使用11种不同固定相对4种模型肽混合物分析


样品:      1. 3-mer

              2. 10-mer

              3. 21-mer

              4. 胰岛素

流动相：250 mM KCl in 50 mM phosphate buffer, pH7.0

流速：    0.3 mL/min

PS: 红色垂直线表示柱死时间, 每个色谱图右上的数字对应色谱柱的柱编号

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图2、在变性SEC条件下，使用11种不同固定相对4种模型肽混合物的分析


样品:      1. 3-mer

              2. 10-mer

              3. 21-mer

              4. 胰岛素

流动相：30/70/0.1 v/v/v MeCN/H2O/TFA

流速：    0.3 mL/min

2


治疗性肽分析

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针对司美格鲁肽、利拉鲁肽等高挑战性脂化肽，#3柱（C3）在三种不同流动相条件下均表现稳健（图3）。在含20% IPA的中等条件下，#3柱（C3）与另外两款竞品并列最佳，峰形窄而对称，选择性一致，可互换使用（图4）。

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图3、在三种不同流动相条件下，使用纳谱分析的#3柱（C3）对6种治疗性肽的分析


样品:      1. 司美格鲁肽 (Semaglutide)

              2. 利拉鲁肽 (Liraglutide)

              3. 艾塞那肽 (Exenatide)

              4. 奥曲肽 (Octreotide)

              5. 艾莫德斯 (Emodepside)

              6. 环孢素 (Cyclosporin)

流动相:  (a) 250 mM KCl in 50 mM phosphate buffer, pH7.0

              (b) 30/70/0.1 v/v/v MeCN/H2O/TFA

              (c) 20/80 v/v ‌Isopropanol‌/150 mM NaCI in 50 mM phosphate buffer, pH7.0

流速：    0.3 mL/min

PS: 黑色垂直线表示柱死时间，图 (d) 、(e) 、(f) 分别为图 (a) 、(b) 、(c) 的局部放大图

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图4、相同流动相条件下，使用6种不同色谱柱对6种治疗性肽的分析


样品:      1. 司美格鲁肽 (Semaglutide)

              2. 利拉鲁肽 (Liraglutide)

              3. 艾塞那肽 (Exenatide)

              4. 奥曲肽 (Octreotide)

              5. 艾莫德斯 (Emodepside)

              6. 环孢素 (Cyclosporin)

流动相：20/80 v/v ‌Isopropanol‌/150 mM NaCI in 50 mM phosphate buffer, pH7.0

流速：    0.3 mL/min

(a) #3柱，(b) #5柱，(c) #11柱，(d) #7柱，(e) #8柱，(f) #9柱

PS: 黑色垂直线表示柱死时间

3


总结

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根据以上内容，可得知：日内瓦大学联合基因泰克对6大品牌11款SEC色谱柱的全面评测中，纳谱分析的BioCore SEC系列色谱柱整体表现突出，对GLP‑1等治疗肽耐受性强、非特异性作用低，峰形尖锐、柱效优异、分离度高、结果可靠；同时在模型肽、治疗肽与寡核苷酸分析中表现稳定，适用范围广、数据可信度高，充分印证BioCore SEC是药物表征与质控的优选SEC色谱柱。

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相关产品订货信息

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参考文献


[1] Mathias Buffab, Alexandre Goyonc, Kelly Zhangc, Davy Guillarmeab，Benchmarking size-exclusion chromatography columns for the analysis of therapeutic peptides and model oligonucleotides

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0021967326002396




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