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四环素类、磺胺类和喹诺酮类这三类药物在养殖业中用来预防和治疗禽畜疾病,若在动物源性食品中残留超标,则会影响人体健康。针对这些成分的残留检测,目前食品检测常用的方法来源是GB 31658.17-2021动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法,但在实际测试过程中,有客户反馈过柱时间过长。因此,纳谱分析对该前处理过程进行优化,开发出一款除脂填料A,搭配符合标准要求的SelectCore HLB固相萃取柱和ChromCore C18色谱柱,可快速且高效去除样品中脂肪组分!
本文件适用于牛、羊、猪和鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织中四环素类(四环素、金霉素、土霉素、多西环素)、磺胺类(乙酰磺胺、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲异噁唑、磺胺甲噻二唑、苯甲酰磺胺、磺胺二甲异嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胶间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胶间二甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑、酞磺胺噻唑)和喹诺酮类(诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、麻保沙星、沙拉沙星、二氟沙星、噁喹酸、氟甲喹)药物残留量的测定。
图1、GB 31658.17-2021 食品安全国家标准 动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
图2、GB 31658.17-2021标准中规定的前处理材料
1、试剂的准备
0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液:取磷酸二氢钠·二水7.8 g,用水溶解并稀释至1000 mL。
0.05 mol/L磷酸氢二钠溶液:取磷酸氢二钠·十二水17.9 g,用水溶解并稀释至1000 mL。
磷酸盐缓冲液:取0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液190 mL,用0.05 mol/L磷酸氢二钠溶液稀释至1000 mL。
Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液:取柠檬酸·一水12.9 g、磷酸氢二钠·十二水10.9 g、乙二胺四乙酸二钠·二水39.2 g,加水900 mL,用1 mol/L的氢氧化钠溶液调pH至5.0±0.2,用水稀释至1000 mL。
洗脱液:取甲醇150 mL,加乙酸乙酯150 mL、浓氨水6 mL,混匀。
复溶液:取水40 mL,加甲醇5 mL、乙腈5 mL、甲酸0.05 mL,混匀。
2、试样提取
称取试料1 g(准确至±0.01 g),加Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液8 mL,涡旋1 min,超声20 min,-2 ℃、10000 r/min离心5 min,收集上清液,残渣中加磷酸盐缓冲液8 mL,重复提取1次,合并2次提取液,混匀。
称取500 mg除脂填料A加入上述提取液中,涡旋1 min,-2 ℃、10000 r/min离心5 min,收集上清液,待净化。
3、试样净化
SelectCore HLB固相萃取柱 200mg/6mL
活化:依次使用5 mL甲醇、5 mL水活化;
上样:将2中制备好的待净化液上样至固相萃取柱中;
淋洗:依次使用5 mL水、5 mL20%甲醇水淋洗,抽干;
洗脱:用10 mL洗脱液洗脱,收集洗脱液;
复溶:洗脱液于45 ℃水浴氮气吹至近干,加入复溶液定容至1.0 mL,涡旋1 min溶解残余物,10000 r/min离心5 min,微孔滤膜过滤,液相色谱-串联质谱测定。
4、液相色谱条件
ChromCore C18色谱柱 1.8μm, 2.1×100mm
5、质谱条件
图3、四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物鸡肉空白基质配置对照品
(10.0 μg/kg)定量离子XIC图
图4、四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物鸡肉基质加标
(加标量:10.0 μg/kg)定量离子XIC图
图5、四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物鸡蛋空白基质配置对照品
(10.0 μg/kg)定量离子XIC图
图6、四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物鸡蛋基质加标
(加标量:10.0 μg/kg)定量离子XIC图
由以上实验谱图及加标回收率数据可知:纳谱分析的除脂填料A、SelectCore HLB固相萃取柱和ChromCore C18色谱柱可快速有效分离杂质和目标物。除脂填料A能去除基质中的脂质,使得净化后上样液过柱速度加快,节省约一倍时间(不同样品表现有所差异),相比其他方法中的正己烷液液萃取除脂法更加方便,而且对目标物无吸附,回收率符合检测要求。
图7、未使用和使用除脂填料A的脂肪基质样本过柱速度对比图
(最后6 mL提取液过柱过程)
实验注意事项: 1、氮吹时间不宜过长,氮吹时间过长容易造成回收率偏低; 2、氮吹复溶后需尽早测定,避免物质降解回收率偏低。
* 其它规格产品信息,可咨询我司当地销售同事或拨打400 808 3822服务热线。