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【2025中国药典】黄芪中赭曲霉毒素A的提取与检测

赭曲霉毒素A（Ochratoxin A，OTA）是曲霉属和青霉属产生的次级代谢产物，广泛存在于食品，饲料和中药材中。赭曲霉毒素A难降解，具有肾毒性、神经毒性、发育毒性等毒性作用。目前研究表明，赭曲霉毒素A不仅在粮食中存在污染，在中药材的污染也有报道，特别是黄芪中赭曲霉毒素A含量较高。2025版中国药典黄芪药材和饮片新增了赭曲霉毒素A的检测要求，本实验参照2025版中国药典，采用纳谱分析的SelectCore OTA免疫亲和柱（中药专用）对黄芪样品进行样品净化，再使用ChromCore C18色谱柱对样品进行含量与加标回收率的测定，结果均符合2025版中国药典要求，为黄芪中赭曲霉毒素A的检测提供参考。

适用范围

参照2025版中国药典 药材和饮片 黄芪中赭曲霉毒素A的测定，本方法适用于黄芪药材、黄芪饮片和炒黄芪饮片。

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图1、2025版中国药典 药材和饮片 黄芪中赭曲霉毒素A的测定方法

实验步骤


1


试剂的准备


70%（体积比）甲醇溶液：量取700 mL甲醇，加水稀释至1000 mL，混匀备用。

PBS缓冲液的制备：称取8.0 g氯化钠、1.2 g磷酸氢二钠、0.2 g磷酸二氢钾、0.2 g氯化钾（或直接使用附带的PBS盐包），加水990 mL使溶解，用盐酸调节pH值至7.0，加水稀释至1000 mL，即得。

聚山梨酯20 PBS缓冲液的制备：取1.0 mL聚山梨酯20，加PBS缓冲液稀释至1000 mL，即得。

2%冰醋酸水溶液：量取20 mL冰醋酸，加水稀释至1000 mL，混匀即得。


2


样品的制备

取供试品粉末约3 g，精密称定，置于均质瓶中，加入氯化钠3 g，精密加入70%甲醇60 mL，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心10分钟（离心速度8000转/分钟），精密量取上清液5 mL，置50 mL量瓶中，用PBS缓冲液稀释至刻度，摇匀，离心15分钟（离心速度8000转/分钟），吸取上清液，待测。


3


固相萃取方法

SelectCore OTA免疫亲和柱（中药专用）3 mL

活化：取出免疫亲和柱，恢复至室温（22-25 °C），放干免疫亲和柱的保护液；

上样：取步骤2中制备好的样品待净化液20 mL上样至免疫亲和柱上，流速为每分钟3 mL，弃去流出液；

淋洗：用聚山梨酯20 PBS缓冲液10 mL淋洗，弃去流出液，使空气进入柱子，再用水10 mL淋洗，流速为每分钟6 mL，弃去流出液，使空气进入柱子，将水挤出柱子；

洗脱：用甲醇1.5 mL洗脱，收集洗脱液，置2 mL量瓶中，并用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，待测。



4


高效液相色谱分析


色谱条件

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5


实验谱图及加标回收率结果

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图2、赭曲霉毒素A标准品、黄芪样品、黄芪样品加标（6 μg/kg）对比图

加标回收率结果

加标量

加标回收率

6 μg/kg

95.79%

20 μg/kg

96.46%

注意事项

1）免疫亲和柱日常在冰箱里4 °C冷藏保存，使用前，需拿出放置室内，使之恢复至室温（22-25 °C）。

2）使用中，赭曲霉毒素A具有较强毒性，应避免与身体直接接触，操作时请注意穿戴好手套、口罩、实验服等，并在通风橱里进行操作。

3）使用后，应当用5%次氯酸钠溶液对接触使用过的玻璃容器进行浸泡过夜处理，避免污染。


6


实验结论

由实验谱图和加标回收率结果可以看出，使用纳谱分析的SelectCore OTA免疫亲和柱（中药专用）可有效去除黄芪中基质干扰；然后搭配纳谱分析ChromCore C18色谱柱，可有效分离杂峰与赭曲霉毒素A，回收率均在90%以上，结果准确可靠，满足中国药典的定量要求。

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