实验结果表明：采用大容量SelectCore Heparin肝素亲和柱进行前处理，加标回收率符合GB 5009.299-2024标准要求，除杂效果显著。相比传统方法，大幅缩短过柱时间，节省注射器耗材，检测效率得到提升，满足国标定量要求。

（1）储存条件和使用条件：肝素亲和柱和乳铁蛋白结合液A日常在冰箱里4 ℃冷藏保存。使用前，需拿出放置室内1 h，使之恢复到室温（22～25 ℃）。

（2）试剂状态：乳铁蛋白结合液A若放置时间过长出现沉淀，使用前摇匀即可。

（3）缓冲液配制：配制磷酸盐缓冲液Ⅱ时，调节pH前初始pH应高于9.00，以确保提取效率。调节pH后加入乳铁蛋白结合液A并定容，混匀即可，避免剧烈搅拌。

（4）流动相配制：三氟乙酸易挥发，配制0.1%三氟乙酸溶液时建议现配现用，并采用新开封或经冰箱保存的三氟乙酸，以免因三氟乙酸纯度不足而影响峰形。

（5）柱容量验证：取5.0 mg/mL牛乳铁蛋白标准储备溶液0.40 mL上样后，可将固相萃取装置上调节阀关闭，使溶液保持5 min后，再打开调节阀，再加入10.0 mL磷酸盐缓冲液Ⅱ进行淋洗。

（6）提取优化：若不使用乳铁蛋白结合液A，需增加提取次数。特别是调制乳粉，建议在定容体积不变的情况下，采用少量多次提取方式以保证提取充分。

（7）样品酸碱度：样品上样前需确认样品偏中性，避免影响亲和吸附效果。

（8）流速控制：固相萃取上样过程中，若滴速过慢可适当加压，保持流速在1～3 mL/min。

（9）过滤吸附风险：部分聚醚砜材质滤器对乳铁蛋白存在约10%的吸附风险。经SelectCore Heparin肝素亲和柱纯化后的溶液澄清度高，建议直接进样，无需过滤器。

（10）色谱柱钝化：首次使用ChromCore 300 C4-T色谱柱时，若出现峰形不对称或响应低，需使用高浓度牛乳铁蛋白对照品（400 μg/mL，进样100 μL）进行钝化处理。钝化后将色谱柱用流动相冲洗至空白进样无乳铁蛋白峰后，方可进行样品分析。

（11）残留清洗：如果出现乳铁蛋白残留，建议进样三次水以降低残留，再进行后续测试。

（12）色谱柱保存：实验结束后，需用纯乙腈冲洗色谱柱30 min，以保障色谱柱性能及使用寿命。