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【应用分享】精准定量！抗低聚半乳糖 (GOS) 干扰！
母乳低聚糖 (human milk oligosaccharides，HMOs) 又称母乳寡糖，是母乳中仅次于乳糖、脂质的第三大固体活性成分，也是母乳与牛乳核心差异化营养组分之一。

大量研究证实，HMOs对婴幼儿生长发育至关重要，具备多重生物活性功能。作为天然益生元，其可精准调控并塑造婴幼儿肠道微生态菌群结构；同时可通过参与机体免疫调控、助力神经系统发育，发挥抗炎、抗病毒作用，有效降低婴幼儿坏死性小肠结肠炎等常见肠道疾病的发病风险。凭借优异的营养活性，HMOs已成为新一代婴幼儿配方奶粉的标杆性核心营养成分。

母乳低聚糖是由半乳糖、葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖、岩藻糖和唾液酸等单糖组成的短链聚合物，其分子结构复杂多样，且存在大量同分异构体，极大增加了分离与精准检测的难度。在《食品安全国家标准 食品中母乳低聚糖的测定》 (征求意见稿) 中，不含低聚半乳糖 (GOS) 的样品需用淀粉葡萄糖苷酶酶解，以去除麦芽糊精、淀粉等基质干扰，适用于7种HMOs的测定。含GOS的样品中，测定乳糖-N-四糖 (LNT) 和乳糖-N-新四糖 (LNnT) 时，也可采用淀粉葡萄糖苷酶酶解，但方法须不受GOS干扰，且对色谱分离要求更高；测定其他HMOs时，还需淀粉葡萄糖苷酶和β-半乳糖苷酶的双酶进行酶解，以去除GOS干扰。所有目标物均经2-氨基苯甲酰胺 (2-AB) 衍生，采用液相色谱-荧光检测器检测，内标法定量。

本文参照食品安全国标标准《食品中母乳低聚糖的测定》 (征求意见稿) ，对食品中HMOs进行了测定。


母乳低聚糖 示意图

图源于网络，侵联删

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本次实验选用纳谱分析BioCore Glycan 3μm, 4.6×150mm和BioCore Glycan 1.8μm, 2.1×150mm色谱柱，参考标准色谱条件，对样品2‘-岩藻糖基乳糖 (2’-FL)、3‘-岩藻糖基乳糖 (3’-FL)、双岩藻糖基乳糖 (DFL)、3‘-唾液酸化乳糖 (3’-SL)、6‘-唾液酸化乳糖 (6’-SL)、乳糖-N-四糖 (LNT) 和乳糖-N-新四糖 (LNnT) +内标昆布三糖的混标溶液、GOS的试样溶液 (2-AB标记) 以及两个不同酶解处理的样品进行分离和检测，详细谱图和方法如下：

一

实验谱图及结果

1


HPLC方法-色谱条件

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1.1

HPLC方法-供试品溶液1



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小结：使用BioCore Glycan 3μm, 4.6×150mm色谱柱，在标准色谱条件下测试HMOs混标溶液、低聚半乳糖 (GOS) 溶液和淀粉葡萄糖苷酶处理的供试品溶液，结果显示：

  1. HMOs混标溶液中8个目标峰分离良好，其中乳糖-N-四糖 (LNT) 和乳糖-N-新四糖 (LNnT) 的分离度Rs=2.14；6’-唾液酸化乳糖的保留时间 (R.T) 为54.43 min，与参考谱图相当；

  2. HMOs中LNT和LNnT与GOS及单酶 (淀粉葡萄糖苷酶) 酶解的供试品中的其它干扰峰分离良好，可对2个目标峰进行准确定量。

1.2

HPLC方法-供试品溶液2



image.png


小结：使用BioCore Glycan 3μm, 4.6×150mm色谱柱，在标准色谱条件下测试HMOs混标溶液和双酶酶解处理的供试品溶液，结果待测样品中HMOs的各目标峰分离较好，不受样品中其它基质成分干扰，可对各目标物进行准确定量。

1.3

HPLC方法-标准曲线



image.pngimage.png


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在标准方法的浓度范围内，考察各目标物的线性，结果7个目标的HMOs线性相关系数r＞0.999，表明HPLC方法的线性相关性良好！

2


UHPLC方法-色谱条件

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2.1

UHPLC方法-供试品溶液1



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小结：使用BioCore Glycan 1.8μm, 2.1×150mm色谱柱，在标准的UHPLC色谱条件下测试HMOs混标溶液、低聚半乳糖 (GOS) 溶液和淀粉葡萄糖苷酶处理的供试品溶液，结果显示：

  1. HMOs混标溶液中8个目标峰分离良好，其中乳糖-N-四糖 (LNT) 和乳糖-N-新四糖 (LNnT) 的分离度Rs=2.68；6’-唾液酸化乳糖的保留时间 (R.T) 为35.201 min，与参考谱图相当；

  2. HMOs中2’-FL, 3’-FL以及LNT和LNnT与GOS及单酶 (淀粉葡萄糖苷酶) 酶解的供试品的其他基质干扰峰分离良好，可对4个目标峰进行准确定量，同时满足SN/T 5880-2025的分离要求；

2.2

UHPLC方法-供试品溶液2



image.png


小结：使用BioCore Glycan 1.8μm, 2.1×150mm色谱柱，在标准的UHPLC色谱条件下测试HMOs混标溶液和双酶酶解处理的供试品溶液，结果待测样品中HMOs的各目标峰分离较好，不受其他样品中其他基质成分干扰，可对各目标物进行准确定量。

2.3

UHPLC方法-标准曲线



image.pngimage.pngimage.pngimage.png



在标准方法的浓度范围内，考察各目标物的线性，结果7个目标的HMOs线性相关系数r＞0.999，表明UHPLC方法的线性相关性良好！

二

实验结论

本实验参考《食品中母乳低聚糖的测定》(征求意见稿) 方法，采用3 μm和1.8 μm的BioCore Glycan色谱柱对HMOs标准溶液、GOS试样溶液及不同酶解处理的供试品溶液进行考察。两款色谱柱均能实现目标峰良好分离；单酶（淀粉葡萄糖苷酶）酶解样品中，LNT/LNnT峰不受GOS及其他基质干扰，满足含GOS样品中LNT/LNnT的测定要求；双酶（淀粉葡萄糖苷酶+β-半乳糖苷酶）酶解样品中，所有目标HMOs分离良好，基质不干扰检测，方法专属性良好。检测图谱与标准参考谱图匹配度高，线性满足定量检测需求，可为食品中母乳低聚糖测定提供稳定可行的参考方案。



三

产品订货信息

常规规格货号

产品描述

货号

BioCore Glycan色谱柱

3μm, 4.6×150mm

B913-030018-04615S

BioCore Glycan色谱柱

1.8μm, 2.1×150mm

B913-018018-02115S

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